(1)第一阶段试管菌种培育:准备850-900毫升清水、100-150毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉20-30克、玉米粉20-30克、葡萄糖20-30克、琼脂粉15-20克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液,将基质液的ph调到7.5-8.5后分装于试管中,接着灭菌、摆斜面得斜面试管,在无菌环境下将蛹虫草菌种接入斜面试管中,并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管,再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第一阶段试管菌种;
(2)第一阶段液体菌种培育:准备750-800毫升清水、200-250毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液,将营养液的ph调到6.5-7.5后分装于液体菌种培养容器中并灭菌得到液体菌种培养基,在无菌环境下将步骤(1)中培养而得的第一阶段试管菌种接到液体菌种培养基中,最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第一阶段液体菌种;
(3)第一阶段子实体培育:准备650-700毫升清水、300-350毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液,并将营养液的ph调到6-7备用;取糯米50-70份、山楂果渣15-20份、山楂枝叶粉碎物10-25份、蚕蛹粉3-PG电子安全性分析5份,将糯米、山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、蚕蛹粉混合起来得混合物料,再把营养液拌入混合物料中,把混合物料的含水量调整到55-60%得培养基质,把培养基质分装到培养容器中并灭菌,在无菌环境下将步骤(2)中培育得到的第一阶段液体菌种接到培养基质中,并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75%及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料,接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90%及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色,最后在温度是20-25度、湿度是80-90%及见光环境下培养至虫草子实体长成;
(4)第二阶段试管菌种培育:550-600毫升清水、400-450毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氢钾2-PG电子安全性分析3克、硫酸镁1-2克、蛋白胨5-6克、琼脂粉15-20克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液,将基质液的ph调到5.5-6后分装于试管中,接着灭菌、摆斜面得斜面试管,在无菌环境下将步骤(3)中培育得到的第一阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中,并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管,再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第二阶段试管菌种;
(5)第二阶段液体菌种培育:450-500毫升清水、500-550毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液,将营养液的ph调到5-5.5后分装于液体菌种培养容器中并灭菌得液体菌种培养基,在无菌环境下将步骤(4)中培养而得的第二阶段试管菌种接到液体菌种培养基中,最后在15-20度及暗光环境下通过深层发酵培养至液体菌种培养基长满菌球或菌丝得第二阶段液体菌种;
(6)第二阶段子实体培育:350-400毫升清水、600-650毫升新鲜山楂果汁、玉竹粉50-60克、葡萄糖20-30克、蛋白胨5-6克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得营养液,并将营养液的ph调到4.5-5备用;取山楂果渣50-70份、山楂枝叶粉碎物20-25份、糯米10-20份、蚕蛹粉3-5份,将山楂果渣、山楂枝叶粉碎物、糯米、蚕蛹粉混合起来得混合物料,再把营养液拌入混合物料中,把混合物料的含水量调整到55-60%得培养基质,把培养基质分装到培养容器中并灭菌,在无菌环境下将步骤(5)中培育得到的第二阶段液体菌种接到培养基质中,并将接好种的培养基质放置在温度是15-20度、湿度是70-75%及暗光环境下培养至虫草菌丝长满培养料,接着将长满虫草菌丝的培养基质放置于在温度是20-25度、湿度是80-90%及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色,最后在温度是20-25度、湿度是80-90%及见光环境下培养至虫草子实体长成;
(7)第三阶段试管菌种培育:650-700毫升新鲜山楂果汁、300-350毫升清水、玉竹粉20-30克、葡萄糖20-30克、磷酸二氢钾2-3克、硫酸镁1-2克、蛋白胨5-6克、琼脂粉15-20克,将上述各种物料一并放入加热容器中,然后加热至各种物料完全溶解于水中得基质液,接着将基质液分装于试管中,并将试管进行灭菌、摆斜面得斜面试管,在无菌环境下将步骤(6)中培育得到的第二阶段蛹虫草子实体分离到斜面试管中,并在15-20度及暗光环境下培养至虫草菌丝长满管,再将长满虫草菌丝的试管放置于在20-25度及见光环境下培养至虫草菌丝转成桔黄色得第三阶段试管菌种。
2.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的山楂果汁制备方法如下:
3.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的玉竹粉制备方法如下:
4.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中所述的灭菌方法如下:
(1)高压灭菌:在压力灭菌容器内、在121度、0.15个兆帕下灭菌30-50分钟;
5.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的蛹虫草菌种为市售的蛹虫草试管菌种。
6.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于步骤(3)和步骤(6)中所述的山楂枝叶粉碎物制备方法如下:
7.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于:步骤(3)和步骤(6)中所述的山楂果渣是步骤(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)和(7)中制备山楂果汁时得到的山楂果渣。
8.根据权利要求1中所述的一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,其特征在于步骤(1)、(3)、(4)、(6)和(7)中所述的见光培养是给予100-600lux光照。
一种以山楂为基质培育虫草菌种的方法,是以山楂果和山楂枝叶为主要原料,以市售的蛹虫草菌种为菌源,将虫草菌种经过多个阶段的驯化培育,培育出适合在山楂基质良好生长的虫草菌种。通过实施本发明,用山楂、玉竹粉和玉米粉组成营养丰富、全面的培基质,虫草菌丝在这样的营养滋养下生长迅猛、菌丝粗壮,虫草子实体个体也生长粗壮,生物转化率高。通过实施本发明,将虫草试管菌种、虫草液体菌种、培育虫草子实体的工序上进行几个阶段的培训驯化,主要是从培养基质中的山楂内含物逐量增加和PH逐步降低来进行驯化,让虫草菌丝从逐步适应到完全适应在山楂培养基生长,最终让山楂培养基质中长出高品质、高产量的虫草子实体。